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Técnicas de tinción

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Albert

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Sirve para observar granos por hongos verdaderos.

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Mezcle 3 ml de solución de Albert con 6 ml de agua destilada y 1 ml de glicerina.

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Coloque un grano en un portaobjetos.

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Agregue varias gotas de la mezcla sobre el grano.

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Oprima con fuerza un cubreobjetos.

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Observe al microscopio.

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Anaranjado de acridina

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Fije las preparaciones en alcohol absoluto durante 1 minuto, más tarde sumérjalas en ácido acético al 1% y lave con agua destilada.

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Tiña con anaranjado de acridina durante 2 minutos.

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Elimine el exceso de colorante con amortiguador (buffer) de fosfatos durante 1 minuto.

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Diferencie en cloruro de calcio 0.1 M durante 1 a 2 minutos.

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Deshidrate, aclare y monte en resina sintética no fluorescente.

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Nota: los reactivos para esta técnica están disponibles en el mercado mexicano.

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Azul de metileno

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Cubra el portaobjetos con la solución saturada de azul de metileno durante 30 segundos.

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Enjuague con agua corriente.

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Seque y observe.

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Azul alciano

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Es útil para teñir Cryptococcus neoformans; las levaduras se colorean de azul claro y los mucopolisacáridos de color turquesa.

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Tiña los cortes con azul alciano durante 20 minutos.

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Lave con agua corriente.

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Tiña con safranina durante 5 minutos.

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Deshidrate con pases sucesivos por alcoholes al 50, 70, 95% y absoluto.

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Monte en resina sintética.

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Blanco de calcoflúor

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Es un blanqueador empleado en la industria textil y del papel; está disponible en el comercio (Blankofor, Bayer®; Calcofluor White®, Polysciences®; Fluorescent brightener, Sigma®).

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La solución se prepara con 1 g de polvo de calcoflúor blanco (Polysciences. Warrington, PA) en 100 ml de agua destilada (solución madre al 0.1%), y se calienta con suavidad.

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Coloque en un portaobjetos una gota de solución de KOH con una gota de la preparación y coloque un cubreobjetos, caliente ligeramente y examine al microscopio de fluorescencia.

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También puede diluir 1:10 en solución acuosa de azul de Evans al 0.05% como coloración de fondo.

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Dominici

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Coloree con solución de Dominici durante 10 a 15 minutos hasta obtener un tinte oscuro.

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Enjuague con agua.

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Coloree con azul de toluidina en agua destilada al 1% durante 2 minutos.

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Enjuague con agua.

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Diferencie con agua acética a 1:500.

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Lave con agua.

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Pase por alcohol absoluto.

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Pase ...

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