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Introducción

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En biología molecular, una gran cantidad de técnicas que se realizan comúnmente requiere el uso de la electroforesis, lo que supone una parte importante del procedimiento sistemático del análisis (separación, purificación, preparación) de los ácidos nucleicos y las proteínas. La mayoría de las biomoléculas poseen una carga eléctrica cuya magnitud depende del pH del medio en el que se encuentran; como consecuencia, pueden desplazarse cuando se someten a un campo eléctrico hacia el polo de carga opuesta al de la molécula. A diferencia de las proteínas, que pueden tener una carga positiva o negativa, los ácidos nucleicos sólo poseen carga negativa, debido a su esqueleto de fosfatos. Por lo tanto, en una electroforesis, los ácidos nucleicos migrarán hacia el polo positivo, es decir, el ánodo. En el caso de las proteínas, que suelen ser de carga neutra, se realiza pretratamiento con detergentes, como el dodecilsulfato de sodio (SDS), que les confiere carga negativa; con ello se homogeneizan las proteínas de la muestra y todas migrarán hacia el polo positivo; sólo se separarán por tamaño.

El principio de la electroforesis consiste en la migración proporcional de las moléculas a través de un gel u otro tipo de matriz porosa, según su peso molecular o tamaño; movimiento generado por el campo eléctrico.

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Elementos necesarios para una electroforesis

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Para realizar una electroforesis se requiere de una serie de elementos descritos a continuación y enlistados en la figura 13-1.

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Figura 13-1

Elementos necesarios para una electroforesis. En la imagen se aprecian los elementos que se requieren para el corrimiento electroforético y visualización del gel.

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Cámara de electroforesis

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La cámara de electroforesis es un dispositivo que permite la generación de un campo eléctrico alrededor de un gel en el que se depositan las muestras. Este campo se genera dentro de una solución amortiguadora en la que se encuentra sumergido el gel que contiene las muestras; el alto contenido de electrolitos permite la transmisión de la corriente eléctrica, manteniendo el pH estable al paso de la corriente. La cámara cuenta con dos polos que se conectan a una fuente de energía. En las cámaras de electroforesis vertical el polo positivo se encuentra en la parte inferior de la cámara (figura 13-2A) y en las horizontales, en uno de los extremos (figura 13-2B). En ambos tipos de cámaras el polo positivo se identifica con color rojo y el negativo con negro.

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Figura 13-2

Cámaras de electroforesis. A) En las cámaras de electroforesis vertical el corrimiento de la muestra sigue la gravedad, ya que el polo positivo se encuentra en la parte inferior de la cámara. B) En la electroforesis horizontal debe cuidarse que el ánodo se coloque hacia el extremo del gel donde corren las muestras, de lo contrario las muestras se ...

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