Capítulo 34: Medios de cultivo

Clásicos

En este rubro pueden ser de tres tipos: naturales, semisintéticos y sintéticos. Los naturales están elaborados con leche, huevo, granos de cereales, levadura de cerveza, frutas y otros compuestos. Los semisintéticos, como el Sabouraud, aportan una fuente de carbono y nitrógeno. Los sintéticos tienen una composición química bien definida y se usan en investigación; no son de uso sistemático.

Los medios de cultivo clásicos se preparan con facilidad; los ingredientes se disuelven por separado en agua y se mezclan en un matraz de Erlenmeyer; se calientan 15 minutos a baño María y 5 a 6 minutos en el mechero, la solución se coloca en tubos y se procesa en autoclave a 110 °C durante 15 a 20 minutos; al sacarlos se colocan en posición inclinada para aumentar la superficie de cultivo. Cuando sea necesario el ajuste de pH, se emplearán ácido clorhídrico (HCl) o hidróxido de sodio (NaOH). Se pueden utilizar cajas de Petri, que deben llenarse después de esterilizar el medio.

Si se emplea tapón de rosca no se debe tapar herméticamente para facilitar la llegada de oxígeno, o se pueden usar tapones de algodón.

Todas las manipulaciones han de realizarse en el área de esterilidad de la llama de un mechero de Bunsen o en una campana de flujo laminar.

Medio glucosado de Sabouraud

Es el medio clásico de aislamiento; en ocasiones no es el idóneo, pero se emplea de manera universal para la identificación sistemática de los hongos.

Fórmula original:

Glucosa cruda 4 g

Peptona granulada (chapoteaut) 1 g

Agar agar 2 g

Agua destilada 100 ml

Fórmula modificada:

Glucosa 20 g

Peptona 10 g

Agar agar 20 g

Agua destilada 1 000 ml

Medio de Sabouraud con antibióticos

Se añaden, disueltos en 10 ml de acetona; cloranfenicol 0.05 g, o cicloheximida (Actidione) 0.5 g, o ambos (se dispone en el comercio de medios ya preparados como Mycosel-agar, Micobiotic-agar, Dermasec-agar), que evitan el crecimiento de bacterias y hongos saprofitos.

Para cualquier aislamiento, se recomienda el medio simple de Sabouraud y el adicionado con antibióticos, pero debe evitarse el cloranfenicol si existe sospecha de actinomicetos, o la cicloheximida (Actidione) si se sospecha de enfermedad por agentes oportunistas.

Otros medios de cultivo

Medio líquido de Sabouraud

Es igual al medio simple de Sabouraud, pero sin agar; puede emplearse para rehidratar cultivos desecados.

Fórmula:

Peptona 30 g

Glucosa 20 g

Agua destilada 1 000 ml

Medio de conservación

...