Capítulo 18: Técnicas en biología celular y molecular

Empleo de doble marcaje de fluorescencia para la vigilancia de fenómenos dinámicos dentro de los organelos celulares de células vivas. Las cisternas de Golgi de una célula de levadura en gemación no se organizan en pilas bien definidas como en la mayor parte de las células eucariotas, sino que están dispersas en el citoplasma. Cada una de las estructuras ovaladas intensamente coloreadas es una cisterna individual, en la que el color se debe a la localización de moléculas de proteína con tinción fluorescente. Las cisternas de color verde contienen una proteína marcada con GFP (Vrg4) que interviene en las actividades iniciales del aparato de Golgi, mientras que las cisternas de color rojo contienen una proteína marcada con DsRed (Sec7) que participa en actividades tardías de dicho complejo. Esta serie de micrografías revela la composición proteínica de cisternas individuales durante un lapso aproximado de 13 min (el tiempo transcurrido se indica en el ángulo inferior izquierdo). La punta de flecha y la flecha señalan dos de estas cisternas todo el tiempo. Estas dos cisternas se automicrografiaron en las filas inferiores de micrografías. En esta serie se aprecia que la composición proteínica de una cisterna individual cambia con el tiempo de una con proteínas de Golgi “tempranas” (verde) a otra con proteínas de Golgi “tardías” (rojo). Tales descubrimientos dan apoyo visual directo al modelo de maduración de las cisternas que se analiza en la pág. 293. (Tomada de Eugene Losev, et al., cortesía de Benjamin S. Glick; Nature 441:1004, 2006, Fig. 3a. Reimpresa con autorización de Macmillan Publishers Ltd.)