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INTRODUCCIÓN

Puntos claves

  • El diagnóstico micológico casi siempre requiere del cultivo para identificar al agente etiológico, en el cual, los medios proveen nutrientes a los hongos, como glucosa, nitrógeno orgánico, agua y peptona, necesarios para su desarrollo.

  • Existen medios rutinarios (o estándar) como el agar de Sabouraud, en los que la mayoría de los agentes fúngicos puede sembrarse. Sin embargo, hay medios especializados para lograr la expresión de características morfológicas o fructificación que ayuden al reconocimiento de estos organismos.

  • Los medios de cultivo pueden prepararse disolviendo los ingredientes por separado, calentarlos, filtrarlos, mezclarlos y esterilizarlos. Sin embargo, en la actualidad, la gran mayoría se encuentra disponible en polvo, al que hay que añadir la cantidad correcta de agua, mezclar y esterilizar.

CLÁSICOS

Pueden ser de tres tipos: naturales, semisintéticos y sintéticos. Los naturales están elaborados con leche, huevo, granos de cereales, levadura de cerveza, frutas y otros compuestos. Los semisintéticos, como el Sabouraud, aportan una fuente de carbono y nitrógeno. Los sintéticos se usan en investigación; no son de uso sistemático.

Los medios de cultivo clásicos se preparan con facilidad; en general, los ingredientes se disuelven por separado en agua y se mezclan en un matraz de Erlenmeyer; se calientan 15 minutos a baño María y 5 a 6 minutos en el mechero; la solución se coloca en tubos y se procesa en autoclave a 110°C, durante 15 a 20 minutos; al sacarlos, se colocan en posición inclinada para aumentar la superficie de cultivo. Cuando sea necesario el ajuste de pH, se emplearán ácido clorhídrico (HCl) o hidróxido de sodio (NaOH). Se pueden utilizar cajas de Petri, que deben llenarse después de esterilizar el medio.

Si se emplea tapón de rosca, no se debe tapar herméticamente para facilitar la llegada de oxígeno; pueden usarse tapones de algodón.

Todas las manipulaciones han de realizarse en el área de esterilidad de la llama de un mechero de Bunsen o en campana de flujo laminar.

Medio glucosado de Sabouraud

Es el medio clásico de aislamiento; en ocasiones no es el idóneo, pero se emplea de manera sistemática para la identificación de los hongos.

Fórmula original:

Glucosa cruda 4 g

Peptona granulada (chapoteaut) 1 g

Agar agar 2 g

Agua destilada 100 ml

Fórmula modificada:

Glucosa 20 g

Peptona 10 g

Agar agar 20 g

Agua destilada 1 000 ml

Medio de Sabouraud con antibióticos

Se añaden, disueltos en 10 ml de acetona; cloranfenicol 0.05 g, o cicloheximida (Actidione) 0.5 g, o ambos (existen en el comercio medios ya mezclados para preparar Agar de Sabouraud y medios con antibióticos, como Mycosel-agar, Micobiotic-agar, Dermasec-agar), que evitan ...

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