CAPÍTULO 35: Tinciones, reactivos, colorantes y fórmulas diversas

TÉCNICAS DE TINCIÓN

Albert

Para observar granos de hongos verdaderos.

Mezcle 3 ml de solución de Albert con 6 ml de agua destilada y 1 ml de glicerina.

Coloque un grano en un portaobjetos.

Agregue varias gotas de la mezcla sobre el grano. Oprima con fuerza un cubreobjetos.

Observe al microscopio.

Anaranjado de acridina

Fije las preparaciones en alcohol absoluto durante 1 minuto, sumérjalas en ácido acético al 1% y lave con agua destilada.

Tiña con anaranjado de acridina durante 2 minutos.

Elimine el exceso de colorante con amortiguador (buffer) de fosfatos durante 1 minuto.

Diferencie en cloruro de calcio 0.1 M, durante 1 a 2 minutos. Deshidrate, aclare y monte en resina sintética no fluorescente.

Nota: los reactivos para esta técnica están disponibles en el mercado mexicano.

Azul de metileno

Cubra el portaobjetos con la solución saturada de azul de metileno durante 30 segundos.

Enjuague con agua corriente.

Seque y observe.

Azul alciano

Es útil para teñir Cryptococcus neoformans; las levaduras se colorean de azul claro y los mucopolisacáridos de color turquesa.

Tiña los cortes con azul alciano durante 20 minutos. Lave con agua corriente.

Tiña con safranina durante 5 minutos.

Deshidrate con pases sucesivos por alcoholes al 50%, 70%, 95% y absoluto.

Monte en resina sintética.

Blanco de calcoflúor

Es un blanqueador empleado en la industria textil y del papel; está disponible en el comercio (Blankofor, Bayer^®; Calcofluor White^®, Polysciences^®; Fluorescent brightener, Sigma^®).

La solución se prepara con 1 g de polvo de calcoflúor blanco (Polysciences. Warrington, PA), en 100 ml de agua destilada (solución madre al 0.1%), y se calienta con suavidad.

Coloque en un portaobjetos una gota de solución de KOH con una gota de la preparación y coloque un cubreobjetos, caliente ligeramente y examine al microscopio de fluorescencia.

También puede diluir 1:10 en solución acuosa de azul de Evans al 0.05% como coloración de fondo.

Eritrosina

Retire el exceso de agar con la ayuda de un bisturí.

Enseguida, fije la preparación con metanol hasta que este se evapore; tiña con eritrosina durante 10 a 15 minutos, al mismo tiempo que se calienta a la flama.

Retire el exceso de colorante con etanol.

Pase por un baño de acetona durante 10 minutos, seguido de un baño en xilol-acetona (1:2) de 10 minutos ...