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Para observar granos de hongos verdaderos.
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Mezcle 3 ml de solución de Albert con 6 ml de agua destilada y 1 ml de glicerina.
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Coloque un grano en un portaobjetos.
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Agregue varias gotas de la mezcla sobre el grano. Oprima con fuerza un cubreobjetos.
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Anaranjado de acridina
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Fije las preparaciones en alcohol absoluto durante 1 minuto, sumérjalas en ácido acético al 1% y lave con agua destilada.
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Tiña con anaranjado de acridina durante 2 minutos.
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Elimine el exceso de colorante con amortiguador (buffer) de fosfatos durante 1 minuto.
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Diferencie en cloruro de calcio 0.1 M, durante 1 a 2 minutos. Deshidrate, aclare y monte en resina sintética no fluorescente.
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Nota: los reactivos para esta técnica están disponibles en el mercado mexicano.
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Cubra el portaobjetos con la solución saturada de azul de metileno durante 30 segundos.
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Enjuague con agua corriente.
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Es útil para teñir Cryptococcus neoformans; las levaduras se colorean de azul claro y los mucopolisacáridos de color turquesa.
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Tiña los cortes con azul alciano durante 20 minutos. Lave con agua corriente.
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Tiña con safranina durante 5 minutos.
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Deshidrate con pases sucesivos por alcoholes al 50%, 70%, 95% y absoluto.
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Monte en resina sintética.
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Es un blanqueador empleado en la industria textil y del papel; está disponible en el comercio (Blankofor, Bayer®; Calcofluor White®, Polysciences®; Fluorescent brightener, Sigma®).
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La solución se prepara con 1 g de polvo de calcoflúor blanco (Polysciences. Warrington, PA), en 100 ml de agua destilada (solución madre al 0.1%), y se calienta con suavidad.
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Coloque en un portaobjetos una gota de solución de KOH con una gota de la preparación y coloque un cubreobjetos, caliente ligeramente y examine al microscopio de fluorescencia.
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También puede diluir 1:10 en solución acuosa de azul de Evans al 0.05% como coloración de fondo.
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Retire el exceso de agar con la ayuda de un bisturí.
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Enseguida, fije la preparación con metanol hasta que este se evapore; tiña con eritrosina durante 10 a 15 minutos, al mismo tiempo que se calienta a la flama.
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Retire el exceso de colorante con etanol.
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Pase por un baño de acetona durante 10 minutos, seguido de un baño en xilol-acetona (1:2) de 10 minutos ...